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p14ARF和MDM2在甲状腺肿瘤组织中的表达

期刊级别: 综合论文写作指导
【摘要】 目的 研究甲状腺肿瘤组织中p14ARF和MDM2蛋白的表达及临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测78例甲状腺乳头状癌(thyroid papillary carcinoma,PTC)、34例甲状腺乳头状微小癌(thyroid papillary microcarcinoma,PTMC)和45例甲状腺腺瘤中p14ARF和MDM2蛋白的表达。结果 p14ARF和MDM2蛋白在三组中表达差异有统计学意义(P<0.01)。p14ARF蛋白在PTC组的阳性率显著低于腺瘤组(P=0.002)及PTMC组(P=0.008)。MDM2在PTC组的阳性率显著高于腺瘤组(P=0.000)及PTMC组(P=0.009)。PTC组与PTMC组中p14ARF蛋白和MDM2蛋白表达显著负相关。p14ARF蛋白表达与PTC组的淋巴结转移显著负相关。结论 p14ARF和MDM2可能参与了PTC与PTMC的发生和发展,p14ARF可作为临床判定PTC生物学行为的辅助指标。
【关键词】 甲状腺肿瘤 p14ARF MDM2 免疫组织化学
0 引言

  甲状腺乳头状癌(thyroid papillary carcinoma, PTC)约占甲状腺恶性肿瘤的80%,近年发现其发病率有上升趋势[1]。细胞周期调控异常与甲状腺乳头状癌的发生密切相关[2], p14ARF蛋白是近来关注较多的细胞周期调控因子,主要通过p14ARF² MDM2² p53途径调控细胞周期[3]。p14ARF和MDM2蛋白在甲状腺乳头状癌的表达及其意义的研究少有文献报道。

  本实验主要是研究这两个指标在78例PTC、34例甲状腺乳头状微小癌(thyroid papillary microcarcinoma,PTMC)和45例甲状腺腺瘤中的表达及其与临床病理因数的关系,并进行相关性观察。
  1 资料与方法
  1.1 一般资料

  本研究所有病例来自无锡市第四医院1995年1月~2006年10月手术标本且临床资料齐备、获得随访者。PTC标本78例,男35例,女43例,中位年龄35岁(12~81岁)。临床分期:Ⅰ期13例,Ⅱ期22例,Ⅲ期20例,Ⅳ期23例。随访时间6~92月,有17例复发。PTMC标本34例,男6例,女28例,中位年龄39岁(25~73岁)。同时取同期甲状腺腺瘤标本45例,男13例,女32例,中位年龄43岁(17~77岁)。
  1.2 试剂与方法

  p14ARF兔抗人多克隆抗体(工作浓度1∶100)、MDM2鼠抗人单克隆抗体工作液,即用型超敏SP(鼠/兔)试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。采用免疫组化SP法,参照试剂盒说明书进行。以已知阳性切片作阳性对照,PBS取代一抗作阴性对照。
  1.3 阳性判定标准

  以棕黄色颗粒定位于细胞核的肿瘤细胞为p14ARF蛋白阳性细胞, 以棕黄色颗粒定位于细胞核和细胞浆的肿瘤细胞为MDM2蛋白阳性细胞。每例随机取10个高倍视野(×400),计数其阳性细胞百分率。按Nakamura判定标准[4]:p14ARF阳性细胞所占百分比<5%为(-),5%~20%为( + ),≥20%为( ++ );MDM2阳性细胞所占百分比<5%为(-),≥5%为( + )。
  1.4 统计学方法

  采用χ2检验,Fisher确切概率法计算P值,指标间的相关性采用Spearman等级相关分析。所有统计学处理均采用SPSS10.0软件包进行。
  2 结果
  2.1 p14ARF和MDM2蛋白在甲状腺肿瘤中的表达

  按腺瘤组、PTMC组和PTC组的顺序,p14ARF蛋白表达显著下降(P<0.01),MDM2蛋白表达显著升高(P<0.01)。p14ARF蛋白在PTC组的阳性率显著低于腺瘤组(P=0.002)及PTMC组(P=0.005)。MDM2蛋白在PTC组的阳性率显著高于腺瘤组(P=0.000)及PTMC组(P=0.016),见表1。
  2.2 PTC组中p14ARF和MDM2蛋白的表达与临床病理因数的关系

  p14ARF蛋白表达与淋巴结转移呈显著负相关(r=-0.287,P=0.011)。p14ARF蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、术后情况无明显关系 (P>0.05) 。MDM2蛋白表达与临床病例因数无关(P均>0.05),见表2。
  表1 p14ARF和MDM2蛋白在PTC、PTMC和甲状腺腺瘤组中的表达(略)
  Tab 1 The expressions of p14ARF and MDM2 protein in PTC,PTMC and thyroid adenoma
  a :Comparison between PTC and thyroid adenoma; b: Comparison between PTC and PTMC; c: Comparison between PTMC and thyroid adenoma
  表2 PTC组中p14ARF和MDM2蛋白的表达与临床病理因数的关系(略)
  Tab 2 The correlations between the expressions of p14ARF and MDM2 protein and the clinicopathological factors in PTC
  2.3 p14ARF蛋白和MDM2蛋白在PTC、PTMC组中表达的相关性

  经Spearman等级相关分析发现,p14ARF蛋白和MDM2蛋白在PTC组中表达呈显著负相关(r=-0.319, P=0.013) ,在PTMC组中表达呈显著负相关 (r=-0.430,P=0.012),见表3。
  表3 p14ARF蛋白与MDM2蛋白在PTC、PTMC组中表达的相关性(略)
  Tab 3 The correlations between the expressions of p14ARF and MDM2 protein PTC nad PTMC
  图1 p14ARF蛋白在甲状腺乳头状微小癌中阳性表达(SP×200)(略)
  图2 MDM2蛋白在甲状腺乳头状癌中阳性表达(SP×200)(略)
  Fig 1 The positive expression of p14ARF protein in PTMC(SP×200)
  Fig 2 The positive expression of MDM2 protein in PTC(SP×200)
  3 讨论

  p14ARF蛋白由位于人第9号染色体短臂2区1带(9p21)的INK4a²ARF基因编码,p14ARF蛋白分子量为14×103、含133个氨基酸。MDM2基因定位于人12号染色体长臂13²14区(12q13²14),MDM2蛋白含491个氨基酸。MDM2蛋白能够与野生型或突变型p53蛋白结合,通过抑制p53基因的反式激活功能而具有成瘤性。p14ARF蛋白主要与MDM2蛋白结合,恢复和稳定细胞p53水平,增强p53在G1→S和G2→M的限制点效应,将细胞周期阻断在G1期和G2/M期或诱导细胞凋亡。近年有学者报道p14ARF可以不通过p53途径调控细胞周期[5]。

  本研究显示按甲状腺腺瘤组、PTMC组和PTC组的顺序,p14ARF蛋白的表达下降(P<0.01),MDM2蛋白表达升高(P<0.01),提示p14ARF和MDM2蛋白与PTC的发生有关,与田桂红等[6]和Horis S等[7]的研究结果相符。p14ARF蛋白和MDM2蛋白表达呈负相关,提示PTC、PTMC中p14ARF蛋白通过MDM2蛋白发挥作用。

  研究证明:细胞癌变是一个多基因参与的多阶段的复杂过程,每一个阶段均有许多不同的分子事件发生[8]。可认为乳头状微小癌是早期阶段,乳头分支少,随着肿瘤的逐渐生长,乳头也随之生长,分支增多[9]。本研究显示p14ARF蛋白在PTC组的阳性率明显低于腺瘤组(P=0.002)及PTMC组(P=0.008)。MDM2蛋白在PTC组的阳性率明显高于腺瘤组(P=0.000)及PTMC组(P=0.009)。这些结果提示p14ARF和MDM2可能是甲状腺乳头状癌发生的晚期事件。

  目前p14ARF和MDM2蛋白与甲状腺乳头状癌临床病理因数的关系研究尚未见文献报道。本研究中p14ARF蛋白表达与淋巴结转移呈负相关,MDM2蛋白表达与临床病理参数无关,提示p14ARF可作为临床判定其生物学行为的辅助指标。

  p14ARF蛋白下调、MDM2蛋白上调可能是甲状腺乳头状癌等恶性肿瘤形成的重要原因之一,检测p14ARF蛋白表达有助于判定甲状腺乳头状癌肿瘤生物学行为,以p14ARF和MDM2为靶点的靶向治疗可能成为肿瘤术后治疗的新方向。
【参考文献】
 
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