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食管鳞状细胞癌中Wnt2、β²catenin、c²myc和cyclinD1

期刊级别: 综合论文写作指导
【摘要】 目的 研究Wnt2、β²catenin及其下游的靶基因c²myc、cyclinD1在食管鳞癌中的表达情况,以期探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用及意义。方法 用免疫组织化学SP法检测40例食管鳞癌患者石蜡包埋的癌组织、癌旁组织及正常组织中Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1表达情况,分析Wnt2、β²catenin和c²myc、cyclinD1表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果 Wnt2、β²catenin和c²myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达阳性率逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.01),β²catenin和c²myc与肿瘤浸润和有无淋巴结转移相关(P<0.05)。结论 Wnt2/β²catenin /Tcf4通路在食管鳞状细胞癌发生发展中起重要作用,该通路有可能成为基因治疗的潜在靶点。
【关键词】 食管肿瘤 Wnt2 β²catenin 免疫组织化学
0 引言

  食管癌是中国北方常见的恶性肿瘤,严重威胁人类健康。食管鳞癌是其最常见组织学类型,Wnt/β²catenin信号通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关[1],尤其在食管鳞癌中缺少较为完整系统的研究,Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1为Wnt/β²catenin信号通路中重要的组成成分,它们在调节细胞增殖,抑制细胞分化及调控细胞周期中起重要作用[2²3],本研究将采用免疫组织化学的方法检测Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1在食管鳞癌组织中的表达情况,以探讨其在食管鳞癌发生发展中的可能作用及机制。
  1 资料与方法
  1.1 临床资料

  选取安阳市肿瘤医院病理科提供的40例食管癌患者新鲜手术标本,所有标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE病理确诊均为食管鳞癌且每份标本均有癌组织,癌旁组织及正常组织,患者年龄45~74岁,中位年龄59.5岁,女18例,男22例,肿瘤组织中高分化6例,中分化19例,低分化15例,所有标本术前均未行化疗、放疗,且无坏死肿瘤组织。
  1.2 试剂

  免疫组化试剂羊抗人Wnt2,鼠抗人β²catenin,鼠抗人cyclinD1,鼠抗人c²myc试剂购自美国Santa CruZ公司,SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥公司。
  1.3 方法

  采用免疫组化SP法,PBS代替一抗作为阴性对照,抗原修复采用微波法,按照试剂盒说明书严格进行操作。

  Wnt2免疫组化结果的判定标准[4]:阳性信号定位于细胞浆,无染色或阳性细胞数<10%为阴性,阳性细胞数>10%为阳性。

  β²catenin免疫组化结果的判定标准:参照Maruyama等[5]的方法,分别从细胞浆、细胞核及细胞膜三个方面进行判断:细胞膜阳性细胞率>70%为正常表达,反之为表达减弱或缺失,细胞浆或细胞核阳性细胞率>10%为异位表达,总之细胞膜表达减弱或缺失及异位表达统称为异常表达。

  c²myc免疫组化结果的判定标准:阳性表达定位于细胞浆,胞浆内出现中黄色细小颗粒的细胞为阳性细胞。

  cyclinD1免疫组化结果的判定标准:阳性表达定位于细胞核,胞核内出现中黄色细小颗粒的细胞为阳性细胞。
  1.4 统计学方法

  采用SPSS13.0统计学软件对所获数据进行统计学分析,各测得值±s表示,检验用单因素方差分析、t检验和相关分析。所有结果均以P<0.05表示差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中的表达

  SP免疫组织化学法检测结果显示,Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达水平依次降低,见图1。Wnt2表达的阳性率分别为85% (34/40)、75% (30/40)、17.5% (7/40),β²catenin表达的阳性率分别为90%(36/40)、77.5%(31/40)、15%(6/40),c²myc表达的阳性率分别为 97.5%(39/40)、67.5%(27/40)、7.5%(3/40),cyclinD1表达的阳性率分别为52.5%(21/40)、32.5%(13/40)、12.5%(5/40),各组三者比较差异均有统计学意义(P<0.01)。
  表1 Wnt2 和β²catenin在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中的表达(略)
  Tab 1 Expression of Wnt2 and β²catenin protein in ESCC, para²carcer tissues and normal mucous membrane tissues
  表2 c²myc和cyclinD1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中的表达(略)
  Tab 2 Expression of c²myc and cyclinD1 protein in ESCC,para²carcer tissues and normal mucous membrane tissues
  2.2 Wnt2、β²catenin、c²myc,cyclinD1在食管鳞癌组织中的表达及与临床病理特征关系的探讨

  免疫组织化学法检测结果表明,β²catenin、c²myc在蛋白水平的高表达与食管鳞癌的浸润深度和淋巴结转移呈相关性(P<0.05),而与肿瘤的分化程度及分期无显著相关(P>0.05),见表1,2。
  a, b, c and d are shown as Wnt2, β²catenin, c²myc,cyclinD1 and respectively
  图1 食管癌组织中Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1的阳性表达 (SP×200)(略)
  Fig 1 Positive expression of Wnt2,β²catenin,c²myc and cyclinD1 in Esophageal cancer tissues by immunohistochemistry (SP×200)
  表1 食管鳞癌组织中Wnt2和β²catenin 的表达与临床病理特征关系(略)
  Tab 1 Relationship between the expression of Wnt2 and β²catenin protein and the clinicopathological characteristics in ESCC
  表2 食管鳞癌组织中c²myc和cyclinD1的表达与临床病理特征关系(略)
  Tab 2 Relationship between the expression of c²myc and cyclinD1 protein and the clinicopathological characteristics data in ESCC
  3 讨论

  Wnt通路是一条进化上十分保守的信号传导通路,其成员具有调控胚胎发育,参与细胞增殖与分化、迁徙和极性等多种重要作用,并具有高度的同源性,其异常激活或调节基因的失调均可导致肿瘤发生。β²catenin是Wnt信号传导途径中最为关键的调控子,其除了介导细胞粘附外还参与基因表达。c²myc和cyclinD1是Wnt通路下游的两个关键的靶基因,在多种肿瘤发生发展及浸润转移中扮演重要角色[6],本研究旨在探讨Wnt信号传导途径中的四个关键因子在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。

  本研究采用免疫组化SP法,分别对食管鳞癌组织、癌旁组织及食管正常黏膜组织中Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1蛋白的表达水平进行分析,发现从食管正常黏膜正常上皮组织到癌旁组织、食管鳞癌Wnt2、β²catenin、c²myc及cyclinD1蛋白表达的阳性率呈逐渐上升趋势,且随着级别的升高其表达阳性率和阳性程度依次升高(P<0.01),提示食管鳞癌的发生可能与Wnt信号传导通路主要因子Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1高表达有关。实验还发现,食管鳞癌组织中β²catenin、c²myc蛋白的表达状况与肿瘤的直径、分期和发生部位无关(P>0.05),但与浸润深度和有无淋巴结的转移有关(P<0.05),提示一定程度高表达β²catenin、c²myc蛋白有助于食管鳞癌浸润和转移,而Wnt2和cyclinD1与肿瘤的直径、分期和发生部位、浸润深度和有无淋巴结的转移均无关(P>0.05)。

  越来越多的证据表明,Wnt家族的多个成员在不同肿瘤的发展中有重要作用,在肺癌中常有Wnt1和Wnt2的过表达[7],头颈部鳞状上皮癌中有Wnt1,5a,7a,10b,13的过表达[8],而乳腺癌中则存在Wnt2和Wnt5a的高表达[9],在肝癌中则存在Frizzle7的高表达,且其mRNA表达程度与TCF/LEF转录活性有关[10]。目前,虽然wnt/β²catenin信号通路在多种肿瘤发生发展中起重要作用,但在食管鳞癌中的研究却鲜有报道,我们研究发现Wnt信号通路关键因子在食管鳞癌组织中均有不同程度的表达,Wnt2在食管癌组织中高表达,在食管癌组织不同分期表达无差异,提示Wnt2在食管鳞癌的早期发生和恶性表型的维持中起一定的作用。β²catenin、c²myc、cyclinD1在食管正常黏膜组织、癌旁组织、食管鳞癌组织中的表达依次升高,且与组织浸润深度和有无淋巴结的转移有关,提示三者可作为食管鳞癌预后的指标之一。

  总之,本研究结果显示,Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1在食管鳞癌组织中不同程度的表达,但体内Wnt信号传递网络的复杂性和分子调控的精确性并不是Wnt2、β²catenin、c²myc、cyclinD1单一因素和指标所能完全解释的,它们在ESCC发病的多个步骤中发挥作用,作用的机制和途径也可能有所不同,因而进一步研究Wnt信号通路与食管癌的发生发展的作用与机制,将为我们进一步寻找新的食管鳞癌治疗靶点提供理论基础和实验支持。
【参考文献】
  [1] Kolligs FT,Bommer G,Goke B.Wnt/β²Catenin/Tcf Signaling:A Critical Pathway in Gastrointestinal Tumorigenesis[J].Digestion,2002,66(3):131²144.
食管鳞状细胞癌中Wnt2、β&sup2;catenin、c&sup2;myc和cyclinD1
食管鳞状细胞癌中Wnt2、β&sup2;catenin、c&sup2;myc和cyclinD1
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