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吡格列酮对重症急性胰腺炎大鼠血清抵抗素、淀粉酶表达的影响

期刊级别: 综合论文写作指导
【摘要】 目的: 研究吡格列酮对重症急性胰腺炎大鼠血清抵抗素、淀粉酶表达的影响,并探讨机制及意义。方法:采用胰管注射牛磺胆酸钠制作40只雄性SD大鼠重症胰腺炎模型,分为未用药组(n=20)、吡格列酮组(n=20),另取20只雄性SD大鼠注射生理盐水作为阴性对照组,分别于术后6、12、24、48 h用双抗体夹心ABC-ELISA方法检测血清抵抗素水平,采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶水平,取胰腺组织进行病理评分。结果:未用药组术后6、12、24、48 h胰腺组织病理评分及血清抵抗素、淀粉酶水平逐渐升高,各时间点差异有统计学意义(P均<0.05);各时间点未用药组和吡格列酮组各指标较阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05);各时间点吡格列酮组各指标低于未用药组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:吡格列酮可降低重症胰腺炎大鼠的血清抵抗素和淀粉酶水平,缩短病程,促进重症胰腺炎恢复。
【关键词】 重症急性胰腺炎;吡格列酮;抵抗素;淀粉酶
  [ABSTRACT] Objective: To investigate the effect of pioglitazone on serum resistin and amylase in rats with severe acute pancreatitis. Methods:Severe acute pancreatitis model was induced by injection of sodium taurocholate into the pancreatobiliary duct of 40 male Sprague Dawley rats. Theses rats were randomly divided into two groups: control group (n=20), pioglitazone group(n=20). And another 20 males SD rats injected with saline served as negative control group. Double antibody sandwich ABC-ELISA method was performed to determine the expression of resistin, serum amylase was detected by automatic biochemical analyzer. At the same time patholoical score was performed to pancreatic tissue. Results: 1)The level of resistin and amylase were increased significantly in control group and pioglitazone group at 6 h, 12 h, 24 h and 4 8h after operation in comparison with that in negative control group(all P<0.05 ); 2)The differences of resistin , serum amylase and patholoical score were not statistically significant (P>0.05) between control group and pioglitazone group 6 h after surgery; 3)Level of resistin , serum amylase and pathological score of pioglitazone group were significantly lower than those of control group (all P<0.05) 12 h, 24 h and 48 h after operation . Conclusion:Pioglitazone may decrease the level of serum resistin of rats with severe acute pancreatitis. Resistin Can shorten the course, and promote recovery of severe acute pancreatitis.
  [KEY WORDS] Severe acute pancreatitis; Pioglitazone; Resistin ;Amylase
  重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)发病快,死亡率较高,抵抗素(resistin) 作为一种促炎因子,与急性胰腺炎的病情程度相关[1,2] 。吡格列酮是高选择性的PPAR-γ激活剂,研究发现:干预性应用PPAR-γ激活剂(罗格列酮)可以降低血清淀粉酶的表达,减轻胰腺组织损伤[3];另有研究认为吡格列酮抗炎机制可能与NF-κB信号活性有关[4],为明确PPAR-γ激活剂对重症急性胰腺炎的治疗作用及其机制,本实验通过大鼠模型来探讨吡格列酮对抵抗素、淀粉酶(AMS)的影响,为临床治疗重症急性胰腺炎提供理论依据。
  1 材料与方法
  1.1 实验动物及分组
  60只清洁级雄性SD大鼠(Sprague Dawley)(购自中山大学动物实验中心,合格证号:2004A089),鼠龄3~4个月,体质量220~260 g,随机分为3组:阴性对照组( n=20 )、未用药组(n=20)与吡格列酮组(n=20)。
  1.2 模型建立
  重症急性胰腺炎大鼠模型参照文献[5]制作,术前禁食12 h,自由饮水。腹腔注射3%的戊巴比妥钠35 mg/kg进行麻醉,取上腹部正中切口进腹,提取十二指肠,结扎近肝门处胆管,于胰胆管乳头开口略偏下对系膜缘肠壁上选一无血管区,用注射器针逆行注入5%牛磺胆酸钠0.1 mL/100 g(美国Sigma公司),维持8~10 min后观察到胰腺组织明显水肿,被膜下可见点状及片状出血灶,表明成功制作重症急性胰腺炎大鼠模型,然后退出导管,将肠管复位,分层关腹;等待10 min后拔穿刺针,关腹,苏醒后禁食,自由饮水。阴性对照组仅牵引十二指肠、胰腺、胰胆管,注射等体积的生理盐水,其余操作方法同模型制作。
  1.3 治疗方法
  吡格列酮组大鼠术前2 h以2 mg/100 g的剂量腹腔注射2%盐酸吡格列酮溶液(由200 mg盐酸吡格列酮片与100 mL的10%二甲基亚砜配置,其中盐酸吡格列酮购自江苏恒瑞医药有限公司,二甲基亚砜为中国医学科学院生物医学工程研究所产品),24 h后重复注射一次;同时未用药组和阴性对照组注射等量的10%二甲基亚砜。
  1.4 标本采集方法
  未用药组(n=20)和吡格列酮组(n=20)大鼠于成模(手术)后6、12、24、48 h各取5只与阴性对照组(n=5),断头处死开腹,下腔静脉取血,离心后取血清保存于-80℃冰箱备测;同时取胰腺组织, 福尔马林固定,石蜡包埋,切片,常规苏木素-伊红 (HE)染色。
  1.5 检测指标及方法
  1.5.1 血清学指标
  用双抗体夹心ABC-ELISA方法(试剂盒为美国R&D公司产品)检测血清抵抗素;采用全自动生化分析仪检测血清AMS,按全自动生化分析仪标准规程操作。
  1.5.2 胰腺病理学检测
  在光镜下观察胰腺病理改变,按Schmidt评分标准[6] 进行评分。
  1.6 统计学处理
  数据以均数±标准差(x-±s) 表示,采用SPSS 16.0统计学软件进行分析,不同时间点的抵抗素、AMS及胰腺病理评分的比较采用方差分析,组间的两两比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 各组大鼠不同时间点胰腺组织病理评分的比较
  胰腺组织病理评分:阴性对照组各时间点评分无明显变化,差异无统计学意义(F=0.78,P> 0.05);未用药组术后6、12、24、48 h评分逐渐升高,各时间点差异有统计学意义(F=32.5,P<0.05);吡格列酮组术后各时间点评分升高不明显,差异无统计学意义(F=0.24,P>0.05)。未用药组术后6、12、24、48 h评分较阴性对照组明显升高,差异均有统计学意义(t分别为-23.48、-24.01、-22.19、-31.73,P均<0.05);吡格列酮组评分亦较阴性对照组明显升高,差异均有统计学意义(t分别为6.00、2.94、4.20、4.46,P均<0.05);吡格列酮组术后6、12、24、48 h评分低于未用药组,差异均有统计学意义(t分别为4.18、2.49、4.19、5.05,P均<0.05),见表1。 海南医学院学报 Vol.18 No.5 May.2012表1 各组大鼠不同时间点胰腺病理评分变化的比较
  2.2 各组大鼠不同时间点血清学指标的比较
  阴性对照组各时间点血清抵抗素和淀粉酶无明显升高,差异均无统计学意义(F分别为0.002、3.96,P均>0.05);术后6、12、24、48 h未用药组、吡格列酮组血清抵抗素水平逐渐升高,各时间点差异有统计学意义(F分别为55.29、7.97,P均<0.05),淀粉酶亦逐渐升高,各时间点差异亦有统计学意义(F分别为55.70、33.45,P均<0.05)。术后6、12、24、48 h未用药组、吡格列酮组血清抵抗素水平较阴性对照组明显升高,差异均有统计学意义(t分别为-5.39、-9.72、-9.86、-15.34和-2.45、-4.35、-3.95、-6.01,P均<0.05);淀粉酶水平亦较阴性对照组明显升高,差异均有统计学意义(t分别为-36.41、-49.09、-21.86、-28.50和-15.17、-11.51、-12.12、-54.84,P均<0.05);术后6、12、24、48 h吡格列酮组血清抵抗素、淀粉酶水平低于未用药组,差异均有统计学意义(t分别为4.32、10.50、8.45、8.88和14.94、8.67、7.36、11.54,P均<0.05),见表2。表2 各组大鼠不同时间点血清抵抗素、淀粉酶水平变化的比较
  3 讨论
  重症急性胰腺炎涉及消化酶的胰内激活和随后的胰腺自身消化,导致单核/巨噬细胞在胰腺内激活并“瀑布式”释放大量炎症介质,产生高细胞因子血症和全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),从而触发对重症急性胰腺炎的“二次打击”,所以大量炎症介质是导致多器官功能障碍综合征和胰腺局部出血、坏死的主要原因。研究证实抵抗素是一个重要的细胞因子,参与炎症反应,在人体的成熟脂肪细胞中抵抗素表达极低[7],而在外周血单核细胞和巨噬细胞中的表达非常丰富[8];在单核细胞分化获得巨噬细胞表型时,抵抗素mRNA水平较分化前增加了4倍[9] ,这些都提示抵抗素的作用可能主要与炎症反应有关。有研究认为抵抗素与炎症因子呈正相关,炎症时抵抗素呈高水平的状态[10],而且抵抗素水平与炎性标记物C反应蛋白(CRP)呈正相关[11]。 本课题组在前期研究[1]中发现抵抗素与IL-6、CRP、淀粉酶和胰腺组织病理变化具有正相关性,认为血清抵抗素是一种胰腺炎病变的标记物,可以成为预测重症急性胰腺炎的一种新的生化指标。本实验通过研究吡格列酮对抵抗素、淀粉酶的影响以探讨PPAR-γ激活剂对重症急性胰腺炎的治疗效果,进一步推理其作用机制。
  本研究发现未用药组和吡格列酮组重症急性胰腺炎大鼠血清抵抗素和淀粉酶术后6、12、24、48 h逐渐升高,各时间点较阴性对照组明显升高;未用药组和吡格列酮组重症急性胰腺炎大鼠术后6 h血清抵抗素、淀粉酶和胰腺组织病理评分有变化,表明重症急性胰腺炎大鼠造模成功,同时说明抵抗素水平随着炎性病变的程度加重而增加;成功造模12、24、48 h吡格列酮组血清抵抗素、淀粉酶和胰腺组织病理评分明显低于未用药组,差异有统计学意义(P<0.05),表明吡格列酮可降低重症胰腺炎大鼠血清抵抗素,能缩短病程,促进重症胰腺炎恢复,同时也可以间接推广至PPAR-γ激活剂的同类(格列酮类)药物对重症急性胰腺炎具有治疗作用,治疗的机制可能不仅在脂质代谢、胰岛素敏感性和细胞凋亡中对有炎性反应的胰腺起重要作用,更有可能在炎症调控方面通过降低炎性因子—抵抗素来减轻胰腺组织损伤,从而改善和缓解重症急性胰腺炎的病情,促进胰腺的康复。徐萍等[12]研究发现吡格列酮可通过调节促炎与抗炎因子TNF-α、IL-6和IL-10的平衡,减轻炎症反应。吡格列酮对重症急性胰腺炎的作用效果及其具体机制有待大量的动物实验和临床试验进一步研究证实。
 
吡格列酮对重症急性胰腺炎大鼠血清抵抗素、淀粉酶表达的影响
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